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完美EB替代物-GelRed核酸电泳

浏览:34 发表时间:2019-04-13 17:20:32

摘要:EB (溴化乙啶)作为目前使用最广泛的核酸凝胶染色试剂,能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度,但它是一种高诱变性的化学物质,而且EB染色后具有较高的背景荧光信号。目前大多数商业化的替代EB的核酸染料在安全性、稳定性和灵敏性等方面不完全令人满意。例如, SYBR Green I 和 SYBR Gold 被厂家宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解,稳定性差导致染色效果极不可靠。SYBR safe 被认为是市场上较为安全的核酸染料 ,但它的染色效果还远不及 SYBR Green I 。至于Goldview,因为从极为相似的对比试验结果来看,该产品似乎就是AO(丫啶橙 ,一种剧毒产品,且荧光亮度不佳)。针对市面上的种种不可靠的EB替代物,Biotium公司的GelRed核酸染料无论在安全性、稳定性、灵敏度等方面的表现都比较令人满意。GelRed专门为配合 312 nm UV 凝胶成像系统而设计。GelRed 尤其在检测低浓度、微量 DNA 方面比 EB 表现出更高的灵敏度,对小分子量的 DNA 检测同样非常灵敏。

核酸电泳除了染料的灵敏度和稳定性,安全性一直以来都是我们首要考虑的因素。GelRed的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞,正是这一特性降低了染料的细胞毒性(如下图)。相反, SYBR Green I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色,这正是由于它能快速的被细胞吞入。由于已知 SYBR Green I 对紫外线导致的突变有强烈的增强作用,因此它的高细胞膜透性使它在紫外环境观察时成为凝胶染色的主要有害物质。EB是一种高灵敏度的嵌入型荧光染色剂,溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配,是一种强的诱变剂。

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