DNA凝胶回收常见问题及对策

1. 没有回收到DNA片段

1）检查漂洗液是否按瓶身标签注明的，加入了指定体积的无水乙醇。

2）凝胶胶块溶胶不彻底，导致DNA没有释放出来，凝胶附在吸附柱表面致使回收率极低，甚至没有回收片段。

3）上样的DNA总量较少。吸附柱总会残留部分DNA，如果上样量过少，回收到的DNA就会过少，甚至没有。

2. 回收率偏低

1）溶解DNA的缓冲液与吸附柱接触时，只有当溶液的pH 值处于酸性状态时，才能达到理想的吸附效果。溶

胶液的pH 值一般在6左右，而琼脂糖凝胶偏碱性。当胶块加入溶胶液后，溶胶液的pH 值必然会受到影响，如

果胶块过大时，pH 值升高就更大，DNA回收率就会降低。所以，尽可能降低胶块体积可以避免回收率偏低。

2）电泳缓冲液如果长时间使用，没有更换，其pH 值会偏高，将影响DNA 的吸附。请更换新的电泳缓冲液

后，再进行电泳，然后切胶。

3）回收的DNA片段的大小对回收率的影响也是差异较大的。一般情况下300-200bp以下的小片段，回收率就会下降，且片段越小，回收率降低越明显。大的DNA片段，比如4-5kb以上的，回收率也会下降明显。遇到类似片段时，

1. 增加回收总量；

2. 将2-3管溶胶液并入一个吸附柱；

3. 洗脱液进行数次循环洗脱
4）洗脱体积偏少时，回收率会明显降低。可以根据试剂盒说明书的要求加入合适的洗脱体积。

在进行洗脱前，将洗脱液于30～60℃温浴，可提高洗脱效率。

5）胶块体积加入偏大或是溶胶不彻底都可能使回收率极大降低。降低胶块体积或是增加溶胶液体积，同时彻

底溶胶会改善回收率。