 > DNA测序 |
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| 一、服务特色 |
| 1. 设备先进 质量一流 |
| 拥有国际先进的ABI 3730XL型DNA测序仪和377型DNA测序仪，长期对外提供测序服务，已为国内知名科研所、大专院校及医疗卫生机构提供了高质量的技术服务。 |
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| 2. 高素质队伍 |
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| 3730XL 测序仪 |
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a. 测序人员都经过了严格专业培训；
b. 熟练掌握所有测序仪器和测序相关实验；
c. 测序部主管有丰富的工作经验；
d. 提供及时周到的技术支持。 |
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| 3. 免费服务 |
a. 测序引物设计和评估；
b. 简单序列拼接；
c. DNA序列的简单分析等。 |
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| 二、测序服务价格： |
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样品种类 |
反应数量 |
元/反应 |
备注 |
菌、质粒 |
少量 |
45 |
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每次10个及以上 |
40 |
全额预付可享优惠 |
50个及以上 |
35 |
预付30%费用 |
500个及以上 |
30 |
预付50%费用 |
未纯化PCR产物 |
45+10（纯化费） |
已纯化PCR产物 |
45 |
特殊测序引物合成：2元/base（3OD） |
备注：大规模测序请询价，预付款可享受到相应的优惠价格 |
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| 三、样品的要求及引物说明 |
1. 各类样品模板均应提供相应引物信息；
2. 未纯化PCR产物：
a. 片段大于200bp；
b. 请提供50ul
PCR扩增产物(总量1ug-2ug)；
c. 取3ul样品，用琼脂糖凝胶电泳应该能够清晰的分辨出目的条带；
d. 自带引物，引物浓度为5-10umol/L, 并请注明引物序列。
3. 已纯化PCR产物：
a. PCR产物溶于蒸馏水中(请勿溶解在TE溶液中)；
b. 浓度大于20ng/ul，体积大于10ul，长片段需适当增加量；
c. 电泳检测条带专一；
d. 自带引物，引物浓度为5-10umol/L, 并请注明序列。
4. 已纯化质粒：
a. 质粒溶于30~50ul
ddH2O中(请勿溶解在TE溶液中)，电泳检测浓度大于50~100ng/ul；
b. 建议用相关试剂盒提取质粒；
c. 如有可能，同时提供1ml含有相应质粒的菌液备用；
d. 需注明载体和插入目的片段长度、以及测序要求。
5. 细菌模板：
a. 说明载体抗性类型，我们提供Amp,
Kan, Tet及Chl四种抗生素；
b. 应为高拷贝质粒，对于低拷贝质粒，请直接提供约1ug纯化质粒；
c. 提供1ml左右过夜培养的菌液，加15%灭菌甘油，于Eppendorf管中封口保存，防止交叉污染或渗漏；
d. 大量样品测序，建议在一次性塑料培养皿固体培养基上穿刺培养；
e. 建议尽量提供穿刺培养的菌种。
6. 自带引物：
a. 浓度不低于5pmol/ml(或5umol/L)，体积大于20ml；
b. 随机引物和简并引物不能用于测序；
c. 尽可能提供引物全序列、PCR退火温度，以供参考。
7. 免费提供的通用引物：
M13 +(即M13(-47))； M13-(即M13(-48))；T7promoter； T7 terminator； SP6；T3；BGH；pGEX5’/3’；5’/3’AOX；α-factor；pBV220+/-； pEGFP-N5’/3’； pEGFP-C5’/3’； pQE30+/-； pGL3+/- |
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| 四、测序报告说明 |
1．提供报告的形式：
(1) 测序报告通常为一份大约600bp的彩色图谱和一份大约900bp的序列；
(2) 大量测序的报告可以采用光盘的形式提供测序结果。
2．查看测序报告方法：
(1) 先阅读Chromas及补丁使用方法文档；
(2) 通过Chromas软件打开图谱文件进行查看及编辑工作。Chromas软件可进行图谱文件的打开、修改、序列的反向互补操作、导出文本序列等。如果发生软件只能打开图谱却不能进行其他任何操作的，是因为软件60天试用期已过；
(3) 序列保存为纯文本文件，可在Notpad或Word中将其打开；
(4) 所测序列是与客户提供的引物方向一致的DNA链序列，测序结果是从引物序列之后开始的，不包括引物序列；
(5) 序列文件提供的序列长度为大约900bp，彩图打印到大约600bp。通常从20～30bp以后到大约700bp之间的序列是可靠的，其后的序列因可能存在错读，只能作为参考。序列以峰型图为准。较长的片段需要双向进行测序或设计合成中间引物才能测通。
3．以下情况下只发E-mail不提供测序报告：
(1) 没有反应信号；
(2) 信号极其杂乱，出现重叠峰形，无法得到有用信息。
4．特殊结构计费：
序列由于有严重的二级结构（Poly
N 结构，GC结构，重复结构，二级回文结构等）导致出现信号中断的情况，均按正常反应计费。 |
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| 五、通用引物 |
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通用引物 |
序列（5’-3’） |
T7 |
TAATACgACTCACTATAGG |
SP6 |
ATTTAGGTGACACTATAGAA |
T3 |
AATTAACCCTCACTAAAGGGA |
T7 ter |
GCTAGTTATTGCTCAGCGG |
pGEX5' |
GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG |
pGEX3' |
CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG |
BGH Rev |
TAGAAGGCACAGTCGAGG |
PBAD For |
ATGCCATAGCATTTTTATCC |
PBAD Rev |
GATTTAATCTGTATCAGG |
PQE5’ |
GGAGAAATTAACTATGAGAGG |
PQE3’ |
GTTCTGAGGTCATTACTGG |
AOX5’ |
GACTGGTTCCAATTGACAAGC |
AOX3’ |
GCAAATGGCATTCTGACATCC |
S-tag |
GAACGCCAGCACATGGACAGC |
U6 Forward |
GGGCAGGAAGAGGGCCTAT |
M13(-21) forward
primer |
TGTAAAACGACGGCCAGT |
M13(-47) forward
primer |
CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC |
M13 reverse
primer（-23）: |
CAGGAAACAGCTATGACC |
2.0 rev primer |
AGGCGATTAAGTTGGGTA |
CMV Forward |
CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
CYC1 |
GCGTGAATGTAAGCGTGAC |
PBV220+ |
GGGCAGCATTCAAAGCAG |
PBV220- |
TTATCAGACCGCTTCTGC |
EGFP-C |
CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG |
EGFP-N |
CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG |
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