新型科研专用细胞-组织基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）

细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）

GK4002-50

GK4002-100

一.  试剂盒组成

Components	GK0221 50 Preps	GK0222 100 Preps
GenClean Column 2-ml Collection Tube Proteinase K* ACL Solution(a) NAB Solution AW1 Solution(b) AW2 Solution(c) AE Buffer(d) Protocol	50 50   25 ml 6 ml 15.5ml 12 ml 12ml 1	100 100   50 ml 12 ml 31 ml 24ml 24 ml 1

*Proteinase K使用前，每管加入1 ml 无菌水溶解，混匀，分装后-20℃保存。

(a) ACL Solution低温时可能出现结晶，请于37℃温育溶解摇匀后使用，不会影响产率。

(b) 首次使用前，必须在AW1溶液瓶中按表示量加入无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持中的AW1乙醇含量。如果您发现AW1由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入0.6倍体积的无水乙醇。

(c) 首次使用前，必须在AW2瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持AW2中的乙醇含量。如果您发现AW2由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。

(d) AE Buffer为10 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA pH 8.5pH8.5。TE(pH 8.0)或者水（pH>7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。

二. 制品说明

GenClean柱的内装有一层惰性大分子材料，它可以选择性吸附核酸物质，但不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质。通过ACL Solution 裂解释放出基因组DNA，然后通过GenClean柱来吸附基因组DNA，经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质, 然后用AE Buffer、TE或者水洗脱。

三．主要用途

从各种动物组织、动物细胞以及啮齿类动物(如鼠等)尾巴等材料中小量提取基因组DNA。

四．主要特点

1. 适用范围广，适用于各种动物组织材料基因组DNA的抽提。

2. 无须酚和氯仿抽提，无须乙醇沉淀。

3. DNA纯度好，得率高，无蛋白质和RNA污染。

五. 操作步骤：

样品预处理：

·动物组织：

1. 切取5～20mg的动物组织材料，在液氮中将组织研磨成粉末，并转移至1.5ml的离心管中。

2. 然后加入400µl ACL Solution，如有凝结块，可以用枪头吹吸打碎。震荡混匀1分钟，加入20µl 

Proteinase K然后置于55℃放置20分钟～3小时，在此期间间或取出混匀，有助于充分裂解。裂解完全的样品应澄清透明。不同来源的组织，完全裂解时间可能差异较大。 

3. 取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。

·啮齿类动物(如鼠等)尾巴：

1. 从动物尾部末端切取0.5～1cm的组织材料，在液氮中将组织研磨成粉末，并转移置1.5ml的离心管中。

2. 然后加入400µl ACL Solution，震荡混匀1分钟，加入20µl Proteinase K然后置于55℃水浴1～3小

时，在此期间可以适当取出混匀，有助于充分裂解。

3. 取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。

·培养成熟的动物细胞：

1. 在500～1000rpm下离心约3～5分钟，收集细胞( 约5x10⁶ )。

2. 加入400µl ACL Solution震荡混匀1分钟，加入20µl Proteinase K,然后置于55℃水浴10～20分钟，在此期间可以适当取出混匀，有助于充分裂解。

3. 取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。

DNA提取：

经过上面预处理的样品按照下面步骤提取基因组DNA。

4. 在经过预处理好的样品中，依次加入100μl NAB溶液，用力摇匀，至于70℃ 10 min。

5. 冷却到室温，加入250μl物水乙醇，混匀，如果有沉淀出现出现，用蓝枪头吹打混匀，加到吸附柱上。

6. 8,000rpm离心1分钟，取下GenClean Column，倒掉收集管中废液。

7. 将GenClean Column放回收集管中，加入500µl AW1 Solution，8,000rpm，室温离心1分钟,倒掉废液。

8. 将GenClean Column放回收集管中，加入500µl AW2 Solution ，8,000rpm，室温离心1分钟,倒掉废液。

9. 重复步骤8一次。

10. 取下GenClean柱，弃去收集管中的废液。将柱放回收集管中，12,000rpm，室温离心1分钟，以除去残留AW2 Solution。

11. 将柱放入新的洁净1.5ml离心管中，在柱中央加入50～100 µl AE Buffer，室温或55℃放置２分钟。然后12,000rpm，室温离心1分钟。离心管中的液体即为基因组DNA。根据用途，样品可于4℃或-20℃保存。

注意：为提高洗脱率，AE Buffer没有必要加热至65℃，高于27℃即可，反复提取可以提高洗脱率。

对于室温较低，离心柱需要在37℃预热，彻底去除乙醇和柱子预热。

      用分光光度计测量基因组DNA含量， OD_260nm值为1相当于大约50 µg/ml双链DNA，并通过0.7%琼脂糖电泳凝胶判定DNA样品的完整性和是否有RNA。

六．储存

常温,一年