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细胞/组织基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)
GK4002-50
GK4002-100
一. 试剂盒组成
Components
GK0221
50 Preps
GK0222
100 Preps
GenClean Column
2-ml Collection Tube
Proteinase K*
ACL Solution(a)
NAB Solution
AW1 Solution(b)
AW2 Solution(c)
AE Buffer(d)
Protocol
50
25 ml
6 ml
15.5ml
12 ml
12ml
1
100
50 ml
31 ml
24ml
24 ml
*Proteinase K使用前,每管加入1 ml 无菌水溶解,混匀,分装后-20℃保存。
(a) ACL Solution低温时可能出现结晶,请于37℃温育溶解摇匀后使用,不会影响产率。
(b) 首次使用前,必须在AW1溶液瓶中按表示量加入无水乙醇,充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧,以保持中的AW1乙醇含量。如果您发现AW1由于运输或保管不当造成容量严重不准,请用量筒定容后再加入0.6倍体积的无水乙醇。
(c) 首次使用前,必须在AW2瓶中加入4倍体积的无水乙醇,充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧,以保持AW2中的乙醇含量。如果您发现AW2由于运输或保管不当造成容量严重不准,请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。
(d) AE Buffer为10 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA pH 8.5pH8.5。TE(pH 8.0)或者水(pH>7.0)均可以使用,但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。
二. 制品说明
GenClean柱的内装有一层惰性大分子材料,它可以选择性吸附核酸物质,但不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质。通过ACL Solution 裂解释放出基因组DNA,然后通过GenClean柱来吸附基因组DNA,经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质, 然后用AE Buffer、TE或者水洗脱。
三.主要用途
从各种动物组织、动物细胞以及啮齿类动物(如鼠等)尾巴等材料中小量提取基因组DNA。
四.主要特点
1. 适用范围广,适用于各种动物组织材料基因组DNA的抽提。
2. 无须酚和氯仿抽提,无须乙醇沉淀。
3. DNA纯度好,得率高,无蛋白质和RNA污染。
五. 操作步骤:
样品预处理:
·动物组织:
1. 切取5~20mg的动物组织材料,在液氮中将组织研磨成粉末,并转移至1.5ml的离心管中。
2. 然后加入400µl ACL Solution,如有凝结块,可以用枪头吹吸打碎。震荡混匀1分钟,加入20µl
Proteinase K然后置于55℃放置20分钟~3小时,在此期间间或取出混匀,有助于充分裂解。裂解完全的样品应澄清透明。不同来源的组织,完全裂解时间可能差异较大。
3. 取出样品,待降至室温时轻轻震荡混匀。
·啮齿类动物(如鼠等)尾巴:
1. 从动物尾部末端切取0.5~1cm的组织材料,在液氮中将组织研磨成粉末,并转移置1.5ml的离心管中。
2. 然后加入400µl ACL Solution,震荡混匀1分钟,加入20µl Proteinase K然后置于55℃水浴1~3小
时,在此期间可以适当取出混匀,有助于充分裂解。
·培养成熟的动物细胞:
1. 在500~1000rpm下离心约3~5分钟,收集细胞( 约5x106 )。
2. 加入400µl ACL Solution震荡混匀1分钟,加入20µl Proteinase K,然后置于55℃水浴10~20分钟,在此期间可以适当取出混匀,有助于充分裂解。
DNA提取:
经过上面预处理的样品按照下面步骤提取基因组DNA。
4. 在经过预处理好的样品中,依次加入100μl NAB溶液,用力摇匀,至于70℃ 10 min。
5. 冷却到室温,加入250μl物水乙醇,混匀,如果有沉淀出现出现,用蓝枪头吹打混匀,加到吸附柱上。
6. 8,000rpm离心1分钟,取下GenClean Column,倒掉收集管中废液。
7. 将GenClean Column放回收集管中,加入500µl AW1 Solution,8,000rpm,室温离心1分钟,倒掉废液。
8. 将GenClean Column放回收集管中,加入500µl AW2 Solution ,8,000rpm,室温离心1分钟,倒掉废液。
9. 重复步骤8一次。
10. 取下GenClean柱,弃去收集管中的废液。将柱放回收集管中,12,000rpm,室温离心1分钟,以除去残留AW2 Solution。
11. 将柱放入新的洁净1.5ml离心管中,在柱中央加入50~100 µl AE Buffer,室温或55℃放置2分钟。然后12,000rpm,室温离心1分钟。离心管中的液体即为基因组DNA。根据用途,样品可于4℃或-20℃保存。
注意:为提高洗脱率,AE Buffer没有必要加热至65℃,高于27℃即可,反复提取可以提高洗脱率。
对于室温较低,离心柱需要在37℃预热,彻底去除乙醇和柱子预热。
用分光光度计测量基因组DNA含量, OD260nm值为1相当于大约50 µg/ml双链DNA,并通过0.7%琼脂糖电泳凝胶判定DNA样品的完整性和是否有RNA。
六.储存
常温,一年